Un fluorómetro es una pieza de equipo que permite el análisis, identificación y cuantificación de sustancias químicas con moléculas capaces de presentar fluorescencia, utilizando la técnica de espectrofotometría de fluorescencia o fluorometría. Podemos decir que este equipo es un dispositivo óptico especial utilizado en los laboratorios, capaz de medir la calidad fluorescente de muestras biológicas o minerales. Entre las aplicaciones en las que se utiliza un fluorómetro, podemos mencionar las siguientes:

• Dinámica proteica
• Análisis cuantitativo
• Estudios de membrana celular
• La cinética de las enzimas
• Nanoestructuras de carbono
• Caracterización de sondas fluorescentes
• Mediciones de fosforescencia a corto plazo
• Mediciones de estabilidad térmica

Estructura de un fluorómetro

Un fluorómetro tiene varios componentes clave. Tiene una fuente de entrada de luz visible ordinaria, y esta luz pasa a través de un filtro de excitación que sólo permite longitudes de onda específicas para impactar la célula de muestra del material bajo estudio. Cuando este material, ya sea orgánico o inorgánico, es bombardeado por estas longitudes de onda controladas de luz, emiten fluorescencia, emitiendo su propia luz característica que luego pasa a través de un filtro de emisión. Las emisiones son leídas por un detector de luz que produce una lectura para que el observador sepa cómo está reaccionando la muestra y cuál es su contenido.

El mecanismo de fluorescencia está marcado por tres pasos secuenciales, denominados respectivamente absorción (1), disipación no radiativa (2) y emisión (3). El fenómeno de la fluorescencia tiene muchas aplicaciones prácticas, entre las que se encuentran por ejemplo el análisis de mineralogía, gemología, sensores químicos (espectroscopia fluorescente), pigmentos y tintas, detectores biológicos y lámparas fluorescentes.

¿Qué es un espectrofotómetro?

Un espectrofotómetro es un equipo que mide la cantidad de luz que absorbe una sustancia. Su eficiencia, resolución, sensibilidad y alcance espectral dependerán de las variables de diseño y de la selección de los componentes ópticos que lo componen. La espectrofotometría es la medida cuantitativa de las propiedades de transmisión de un material basado en la onda luminosa.

Se utiliza para medir ciertos compuestos, como un fármaco, para asegurarse de que es eficaz y seguro para los consumidores. Puede medir el crecimiento bacteriano o diagnosticar a un paciente basándose en su orina. También se utiliza en el análisis de ADN, ARN y proteínas.

Estos kits nos dan información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra, porque cada sustancia tiene una disposición tridimensional particular de átomos que hace que cada sustancia tenga características únicas. También nos dice qué cantidad de la sustancia nos interesa está presente en la muestra. La concentración es proporcional a la absorbancia, según la Ley de Beer-Lambert: cuantas más moléculas estén presentes en la muestra, mayor será la cantidad de energía absorbida por sus electrones. El espectrofotómetro mide la absorbancia de una muestra en los espectros de luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm).

Estructura de un espectrofotómetro

• Fuente de luz: ilumina la muestra. Debe cumplir con las condiciones de estabilidad, direccionalidad, distribución espectral continua de energía y larga vida. Las fuentes utilizadas son la lámpara de tungsteno y la lámpara de arco de xenón.
• Monocromator: Es un dispositivo que permite obtener luz monocromática, y está compuesto por las hendiduras de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión. Aísla la radiación de la longitud de onda deseada que es incidente o se refleja en el conjunto.
• Fotodetectores: En los instrumentos modernos hay una serie de 16 fotodetectores para percibir simultáneamente la señal en 16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible.

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