La fluorometría es una técnica de análisis óptico con gran variedad de aplicaciones, no requiere mayor experiencia para ponerla en uso, además, existen equipos comerciales que ofrecen potenciales ventajas para diversos estudios. Tal es el caso del fluorómetro, un dispositivo modular integrado que permite medir los parámetros de fluorescencia (intensidad, longitud de onda y espectro de emisión), es una herramienta útil para monitorizar los cambios a nivel molecular de los sistemas fluorescentes, las especies y cantidad de moléculas en un medio. Es un instrumento sensible, versátil, económico y de fácil manejo, puede ser utilizado tanto en el laboratorio como un instrumento de medición en campo.

Básicamente hay dos tipos de fluorómetros, el fluorómetro y el espectrofluorómetro. Los fluorómetros poseen una fuente de excitación, filtros, celdas de muestra y detectores de fluorescencia. Los filtros permiten una configuración de un solo haz para controlar la intensidad, limitar la longitud de onda incidente y de emisión, y reducir los efectos de fluctuaciones en la respuesta. Estos dispositivos se pueden ajustar para adaptarse a un amplio rango de concentraciones manteniendo una alta precisión. A diferencia de este, el espectrofluorómetro utiliza un monocromador de rejilla. Entender el fenómeno implicado en la técnica analítica es fundamental al momento de escoger el diseño tecnológico.

Origen de la Fluorescencia y Fundamentos

La interpretación física de la fluorescencia fue introducida por George G. Stokes en el año 1852, después de estudiar la luminiscencia azul en un mineral de fluorita. Stokes observó que la longitud de onda emitida por fluorescencia era mayor que la longitud emitida por la luz incidente. Se dice que una sustancia posee fluorescencia cuando la diferencia entre la energía absorbida del fotón ultravioleta y la emitida por el fotón visible se disipa de forma inmediata. Esto último sucede porque al ser incidida la molécula por la luz, esta absorbe fotones, lo cual aumenta la banda de energía de los electrones a un estado excitado, al éstos relajarse a su estado cero, pierden energía vibracional y el espectro de emisión se mueve a longitudes de ondas más largas.

Algunos consejos útiles

• Las mediciones de fluorescencia se realizan con relación a alguna sustancia estándar. Esto se hace dividiendo el haz de la fuente en un haz de referencia y uno de muestra. 
• La intensidad de la fluorescencia es inversamente proporcional a la temperatura, por lo que es importante tener cuidado al comparar muestras medidas a diferentes temperaturas ambientales.
• Mediante el uso de filtros espectralmente selectivos o monocromadores en el detector de fluorescencia, es posible evitar la interferencia causada por la dispersión que presentan otras sustancias o de la radiación directa excitante.
• Para mantener la linealidad de las concentraciones es necesario preparar la curva de calibración de fluorescencia frente a concentración.
• Durante la preparación de la muestra y el proceso de medición debe evitar cambios bruscos en la temperatura, esto puede causar la degradación de la muestra o que disminuya la fluorescencia.

Aplicaciones del Fluorómetro

Gracias a su versatilidad y simplicidad, la fluorometría es una técnica con amplia gama de aplicaciones. De las cuales destacan el análisis cualitativo y estructural para la identificación de sustancias (compuestos heterocíclicos e hidrocarburos aromáticos), identificación de concentración de iones inorgánicos, compuestos orgánicos y biológicos con límite de detección de hasta 1 ppt.

 Los recientes avances han permitido que el fluorómetro pueda ser utilizado como instrumento de campo para la medición in-situ de forma sencilla y económica. El fluorómetro es un dispositivo útil en variedad de ciencias, va desde biológicas (identificación de concentraciones de ADN, ARN, PCR, enzimas y proteínas), químicas (velocidad y mecanismos de reacción, caracterización de materiales poliméricos y nanomateriales), ambientales (determinación de metales pesados, trazado de marcado biológico), entre otras.

En Kalstein somos FABRICANTES, le ofrecemos equipos de calidad, contamos con un fluorómetro de tecnología, controlados por microprocesadores que utilizan técnicas de procesamiento de señales digitales de circuitos integrados, capaces de medir la absorbancia de la muestra hasta 260 nm, la lectura es menor que los productos de la serie Nano, pero es mucho más precisa. Nuestros equipos ofrecen ventajas como pantalla táctil de 4,3 pulgadas sencilla para utilizar, respuesta rápida con alta sensibilidad, capacidad de almacenamiento de 1.000 datos con salida de puerto USB, canales ópticos de fluorescencia especiales para ácido nucleico, adaptadores de tubo PCR de 0,5 ml y 0,2 ml. Para mayor información, COMPRA o VENTA, visite nuestro catalogo AQUI