La PCR es un procedimiento sencillo y ampliamente utilizado en la ampliación del ADN, lo que es indispensable en cualquier laboratorio, pues es más eficaz y rápido, como en el diagnóstico de enfermedades como COVID-19, VIH o cáncer, permitiendo la detención temprana para evitar propagación de contagios, y además establecer tratamientos que mejoren la calidad de vida de los pacientes.

Esta técnica de PCR es muy utilizada en investigaciones científicas y la biología molecular, la reacción de PCR, requiere la presencia de ADN molde, cebadores, nucleótidos y ADN polimerasa, estos componentes cumplen ciertas características y funciones que permiten a la maquina o Termociclador produzca ciclos repetidos de amplificación de AND.

Cómo funciona el Termociclador PCR

El aparato o equipo para amplificar el ADN, es un Termociclador, con un bloque térmico con aguajeros, en el que se colocan los tubos de ensayo, luego el Termociclador eleva y baja la temperatura del bloque en tres etapas básicas ya programadas por el usuario; la primera reacción se calienta por encima del punto de desnaturalización de las dos cadenas de ADN complementarias del ADN diana, lo que produce que las hebras se separen.

Seguido se baja la temperatura parta que los cebadores específicos se unan a los segmentos de ADN diana, este proceso se denomina hibridación, luego la temperatura se eleva nuevamente para que el ADN polimerasa sea capaz de extender los cebadores añadiendo nucleótidos a la hebra de ADN que se esta construyendo.

Funcionamiento del Termociclador

Este tipo de aparato generalmente tiene dos tipos de formas para funcionar, la primera es mediante un bloque de resistencia eléctrica, de esta manera se distribuye la temperatura de manera constante en lapsos de tiempos ajustables, normalmente las temperaturas varían entre 4 y los 90°C; permitiendo de esta manera que el ADN pierda sus propiedades naturales y siendo posible la separación de las hebras requeridas para realizar el análisis.

Seguidamente hace poco apareció una nueva modalidad llamada tecnología Peltier, en esta oportunidad los cambios de temperatura se realizan a través de un voltaje eléctrico, y su principal función es producir electricidad que se transforma en temperaturas altas o bajas; en el Termociclador se encuentran dos semiconductores por junturas de Peltier que hace este proceso posible; tiene sus ventajas como eficiencia y precisión con respecto a las muestras y los resultados.

Descripción de la técnica utilizada en los Termocicladores PCR

Estos aparatos realizan un ciclo completo que aumenta o disminuye la temperatura de un bloque, para mejorar la transmisión de la temperatura los tubos de 0,2-0,5 ml tiene la base cónica una pared muy fina para evitar la condensación dentro del tubo, los Termocicladores calientan la tapa del tubo durante el proceso; la PCR termina con un ciclo final de extensión a 72°C de unos 10 minutos para asegurar que el ADN de cadena sencilla sea completado con la hebra complementaria.

Terminada la acción el bloque del Termociclador queda a 4°c a la espera de recoger los tubos y correr un alícuota de su contenido en un gel agarosa y así comprobar si el fragmento de tamaño esperado ha sido amplificado correctamente; los resultados de una PCR dependen del grado de degradación del ADN original, de la existencia de inhibidores de la reacción y de la similitud de los cebadores.

Precauciones de uso del Termociclador PCR

• Debe usar ropa y pantalla facial y controlar la intensidad del equipo, que puede ser la máxima con agua y la mínima si se utiliza gel de agarosa, deberá existir una tabla de referencia que muestre los tiempos de cada posición del potenciómetro y las cantidades a emplear.

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